期刊简介
本刊为全国一类中医学术性期刊，以报道本院教育、科研成果和临床经验为主，兼顾本省及国内外有学术见解的优秀中医学论文，以提高为主兼顾指导自学。
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首页>浙江中医药大学学报杂志
- 杂志名称：浙江中医药大学学报杂志
- 主管单位：浙江中医药大学
- 主办单位：浙江中医药大学
- 国际刊号：1005-5509
- 国内刊号：33-1349/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：1989年获浙江省高校学报编辑质量三等奖期刊收录：国家图书馆馆藏, 上海图书馆馆藏, 哥白尼索引(波兰), 维普收录(中), 万方收录(中), CA 化学文摘(美), 知网收录(中)
hIL-2与ZsGreen双基因共表达腺相关病毒的包装及鉴定
陈如意；岳静；章旭君；黄春琦；张婷；许健
关键词：5型腺相关病毒, 人白介素-2, 绿色荧光蛋白, 胰腺癌
摘要：[目的]包装并鉴定带有人白介素2（hIL-2）及ZsGreen的双基因共表达的重组5型腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 5, rAAV5），为今后利用5型重组腺相关病毒载体进行胰腺癌基因治疗提供研究基础。[方法]以5型腺相关病毒包装系统（helper-free system）为模版，PCR法扩增pLVX-IRES-ZsGreen和PES-IL-2模板上的IRES-ZsGreen和IL-2基因，利用酶切位点插入重组腺相关病毒骨架质粒，获得重组质粒pAAV-hIL-2-IRES-ZsGreen。经三质粒共转染AAV293细胞包装重组腺相关病毒rAAV5-hIL-2-IRES-ZsGreen。荧光显微镜下检测病毒包装效率，超速离心纯化、浓缩重组病毒，qPCR测定病毒的滴度。重组病毒转导细胞经荧光显微镜检测、外源基因经PCR检测证实病毒包装结果。[结果]5型重组腺相关病毒骨架质粒pAAV-IL-2-IRES-ZsGreen经双酶切和测序鉴定，确定其序列正确。荧光显微镜下观察三质粒共转染AAV293细胞72h后，病毒包装效率达90%以上。5型重组病毒感染HEK 293细胞48h有荧光出现，重组病毒基因组成功扩增出外源基因IL-2，证明有感染力的重组病毒包装成功。[结论]成功包装带有hIL-2及ZsGreen标记的双基因共表达重组腺相关病毒，滴度达到2.62×1012。
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